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(Chercheur Qualifié) coordonnées Denis LAFONTAINE Faculté des Sciences tel 02 650 97 71(02 650 97 51), fax 02 650 97 47, Denis.Lafontaine@ulb.ac.be Institut de biologie et de médecine moléculaires ULB CP300, rue des Professeurs Jeener et Brachet 12, 6041 Charleroi (Gosselies) sujet de recherche Etude de la Biogenèse du Ribosome Eucaryote: caractérisation fonctionnelle de facteurs requis à la maturation et aux modifications du pré-ARNr, à l'assemblage des sous-unités ribosomiques et aux trafics intra-cellulaires d'ARN L'étude de la biogenèse du ribosome eucaryote permet d'appréhender la majorité des étapes de l'expression des gènes: la synthèse de composants ARN et protéiques, leur modification et maturation, leur assemblage en particules ribonucléoprotéiques et enfin leur transport entre différents compartiments cellulaires. Les ARN ribosomiques ne sont pas produits sous leur forme mature mais au départ de précurseurs de grande taille. Ces derniers sont successivement clivés (par l'action d'endo- et d'exoribonucléases), modifiés (essentiellement par méthylation de ribose, de base et formation de pseudouridines) et enfin assemblés avec leurs protéines cognitives en sous-unités ribosomiques. Les modifications du pré-ARNr sont largement médiées par une classe spécifique de petits ARNs guides, les snoRNAs (small nucleolar RNAs). Les snoRNAs sont associés avec plusieurs protéines en snoRNPs, parmi celles-ci se trouve l'enzyme de modification. Chaque site de modification est identifié par appariement Watson-Crick entre un snoRNA spécifique et le pré-ARNr. En quelque sorte, le snoRNA porte l'enzyme sur le site à modifier. La majorité des étapes de synthèse du ribosome ont lieu dans un compartiment cellulaire spécialisé, le nucléole. Les protéines ribosomiques et les snoRNAs, qui sont respectivement produits dans le cytoplasme et le nucléoplasme, doivent donc être spécifiquement dirigés vers ce compartiment. En fin de biogenèse, les sous-unités sont exportées en masse (±5000/minute chez la levure) vers le cytoplasme. Au cours des cinq dernières années, j'ai identifié plusieurs protéines impliquées dans les clivages et la modification du pré-ARNr. En particulier: la diméthyl-transférase de l'ARNr 18S (Dim1p), plusieurs protéines spécifiques des snoRNPs, y compris les activités catalytiques présumées (Noplp, Nop56p, Nop58p et Cbf5p), et récemment deux hélicases putatives à ARN (Dhrlp et Dhr2p). A présent, je poursuis la caractérisation fonctionnelle de ces protéines et je développe plusieurs projets visant à une meilleure compréhension des mécanismes de trafic intra-nucléaire d'ARN (en utilisant comme modèle les snoRNAs) et d'export des sous-unités ribosomiques. thèse Approche génétique du rôle fonctionnel de la double diméthylation universelle m6/2Am6/2A de l'ARNr 18S chez la levure Saccharomyces cerevisiae (12/09/1995)